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蛋白纯化岗位综合试题 一、判断题（每小题1分，共10分） 1、盐析：一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程( √ ) 2、一般而言，离子强度（盐浓度）越高，物质所形成的亲水键越强(× ) 3、排阻极限：指不能进入凝胶颗粒内部网孔的最小蛋白的分子量( √ ) 4、离子交换剂的电荷密度：指IE介质颗粒单位表面积的功能基团数量，它决定着离子交换剂的总交换容量( √ ) 5利用蛋白质与其专一性配体之间的特异性生物学亲和力作用，对蛋白质进行分离纯化的层析技术即亲和层析( √ ) 6、离子交换剂的有效（实际）交换容量：指在一定的实验条件下，每克湿介质或每毫升湿胶吸附蛋白质的实际容量(×) 7、影响疏水作用的因素包括：盐浓度，温度，pH，表面活化剂和有机溶剂等（ √ ） 8、过滤：利用小分子能通过，而大分子不能透过半透膜的原理，把不同性质的物质彼此分开的一种方法（ ×） 9、梯度洗脱：进行梯度洗脱时，洗脱缓冲液的pH或离子强度是阶段发生变化的，洗脱剂的洗脱能力也是阶段增加的（ ×） 10、截留分子量(molecular weightcut-off, MWCO)：不能通过膜的最小分子量（ √） 二、填空题（每小题1分，共20分） 1、聚丙烯酰胺凝胶是一种以（ 丙烯酰胺单体 ）为材料，（甲叉双丙烯酰胺 ）为交联剂，在催化剂（过硫酸铵 ）及加速剂：（ TEMED ）作用下，把（ 丙烯酰胺 ）单体聚合成三维网孔结构的高分子聚合物 2、常见的离子交换树脂有：（ 聚苯乙烯树脂 ）、（聚异丁烯酸树脂 ）、（聚丙烯酸树脂）等 3、盐溶：蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随着盐浓度的增高而（ 上升 ） 4、常见的絮凝剂：（ 淀粉 ）、（树脂 ）、（ 单宁 ）、（ 离子交换树脂 ）及（纤维素衍生物 ）等 5、疏水层析其原理如下：蛋白质表面一般有（ 亲水 ）与（疏水 ）基团，疏水层析是利用蛋白质表面某一部分具有（ 疏水 ）性，与带有（疏水性 ）的载体在（ 高盐浓度 ）时结合。在洗脱时，将（ 盐浓度 ）逐渐降低，因其疏水性不同而逐个地先后被洗脱而纯化，可用于分离其它方法不易纯化的蛋白质。 三、简答题（每小题10分，共30分） 1、 手动装柱，如何检测装柱质量 a、对光检查。对光肉眼观察装填平衡好的凝胶柱，柱内凝胶应均匀、无纹路、无气泡 b、可通过加样易于观测的有色物质进行洗脱（如蓝色葡聚糖-2000、血红蛋白等），来观察洗脱过程中中色带下降均匀与否，判断装柱质量。如果色带歪曲弥散，则需重新装柱。 2、、离子交换剂按功能基团类型不同可分为？ 强阳离子交换剂（强酸型） 弱阳离子交换剂（弱酸型） 强阴离子交换剂（强碱型） 弱阴离子交换剂（弱碱型） 3、SDS-PAGE分离蛋白质混合物的原理？ 去垢剂SDS十二烷基硫酸钠， CH3(CH2)11OSO3Na，破坏蛋白质分子的氢键和疏水键，并与之结合形成SDS-蛋白质复合物；强还原剂β-巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT），破坏蛋白分子二硫键 结果导致：SDS-蛋白复合物带上大量负电荷，且不同蛋白质有着相同的荷质比（SDS与多数蛋白质的结合比为1.4g SDS/1g 蛋白质）蛋白分子变成椭圆棒状，不同的蛋白分子无形状差别，棒的长度与其分子量成正比 因此，对于SDS-PAGE，蛋白质的迁移率仅与分子量有关。电泳过程中蛋白质天然构象被破坏，生物学活性丧失 四、论述题（每题20分，共40分） 1、影响蛋白质电泳速度的内在因素、外在因素有哪些？常用的电泳技术？ 内在因素：蛋白质分子所带电荷的电性和电量：电性决定电泳方向；电量越大，迁移速度越快。蛋白质分子的大小和形状：分子质量越小、形状越接近球形，在电场中迁移速度越快 外在因素：溶液pH（决定蛋白质所带电荷的电性和电量）、溶液的离子强度（越低，迁移越快；一般应在0.01~0.2 mol/L之间）、电场强度、电渗现象、电泳支持介质、温度 常用电泳技术 ① 常规聚丙烯酰胺凝胶电泳 （常规PAGE） ②十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS-PAGE） ③ 等电聚焦 （isoelectrofocusing，IEF） ④ 双向电泳 （2-D electrophoresis，2-DE） ⑤ 转移电泳 （westerning blotting，Wb） ⑥ 免疫电泳 （immunoelectrophoresis，IE） ⑦ 毛细管电泳 （capillary electrophoresis，CE） | 
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