益生菌耐酸耐胆盐性质的初步探讨

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益生菌耐酸耐胆盐作用的重要性
　　益生菌被食入人体后，在人体肠道内存活能力的高下直接关系到产品能否发挥健康的促进作用。因此益生菌耐酸耐胆汁特性是益生菌作为功能性食补因子的一项重要指标。报道，为了防止有关疾病的发生，只有摄入含有106cfu/ml或106cfu/ml以上的益生菌才能充分发挥其健康促进特性。
　　胃酸和胆汁盐具有抗菌性，益生菌被食入后菌体必须通过恶劣的胃液，同时要抵抗来自胰腺的胆汁盐。人体消化道中存在胃酸，能够抵抗较强的酸性环境是益生菌能在肠道中存活和发挥作用的先决条件。
　　胃液PH的大小根据饮食结构不同而波动很大，通常PH为3左右，空腹食用酸性食品可达1.5，食用碱性食品可达4-5，且食物尤其是流食通过胃的时间相对较短，一般1-2小时。将MRS培养基用0.1mol/l的HCL调至PH分别为1.5、2.5、3.5、4.5，并接入活化好的各菌株，37度培养6小时后进行活菌计数。只有具有较强耐酸能力的菌株才能顺利通过胃酸环境而到达肠内。
　　人体肠道内还存在来自胰腺分泌的胆汁盐，所以菌种对胆盐的耐受性也是衡量益生菌的一项重要指标。人体小肠中胆汁盐的含量以0.03-0.3℅而波动着，只有具有较强耐胆汁盐能力的菌株才能顺利通过小肠而到达大肠。
益生菌在模拟胃肠环境中的抗性研究
1、耐酸性试验
　　①将培养好的益生菌斜面用2ml生理盐水洗脱
　　②与法兰标准比浊管3.0进行比浊，将菌悬液浓度调整为约109cfu/ml
　　③取定量菌悬液加入到磷酸缓冲液中，37℃厌氧培养3hr
　　④适当稀释后，进行平板计数，每组实验设置3个对照
2、耐酸耐胆盐综合性试验（胆盐浓度0.15%）
　　①将培养好的益生菌斜面用2ml生理盐水洗脱
　　②与法兰标准比浊管3.0进行比浊，将菌悬液浓度调整为约109cfu/ml
　　③取定量菌悬液加入到磷酸缓冲液中，37℃厌氧培养2hr
　　④从pH值3.0磷酸缓冲液中取1ml加入到9ml猪胆盐浓度为0.15%的溶液中，37℃厌氧培养48hr
　　⑤适当稀释后，进行平板计数，每组实验设置3个对照
3、耐酸耐胆盐综合性试验（胆盐浓度0.3%）
　　选择存活率高于40%的菌株进行猪胆盐浓度为0.3%的综合筛选。方法同上。
4、结果
　　根据上述方法，可以首先对试验菌株进行初步的筛选，结合其它功能筛选的试验方法，形成一系列关于益生菌鉴定、筛选和功能性试验的方法：包括API技术鉴定乳酸菌的试验方法；采用肠细胞HT－29为试验模型，建立益生菌在肠道内吸附的体外试验方法；气相色谱法测定胆固醇的检测方法；益生菌抑制幽门螺杆菌的体外试验方法。从而科学鉴定这些不同益生菌菌种的活性和功能效果，建立益生菌菌种库。为良好益生菌菌种的产业化生产应用，奠定扎实的理论基础。