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标题: 同型半胱氨酸的临床检测的方法 [打印本页]

作者: glory 时间: 2017-1-25 14:03
标题: 同型半胱氨酸的临床检测的方法
同型半胱氨酸的临床检测的方法
同型半胱氨酸的定义
同型半胱氨酸、高半胱氨酸或同型半胱氨酸是一种不同的氨基酸半胱氨酸,其中包含一个额外的亚甲基组(sh)侧链硫醇基的一部分(ch2)。
同型半胱氨酸的化学性质
同型半胱氨酸的额外的亚甲基硫醇基接近羧基,使它能够发起一个化学反应形成五元环称为同型半胱氨酸thiolactone。这个反应通常发生在氨基酸形成肽键与其相邻的一部分。同型半胱氨酸与蛋白质不适合混合,自己因为homocysteine-containing蛋白质分解。
同型半胱氨酸是由S-adenosylmethionine通过两个反应步骤通路,可以转换为蛋氨酸或转换为半胱氨酸或牛磺酸通过硫转移途径。尽管同型半胱氨酸可以转换为半胱氨酸,没有证据表明人类直接消费的同型半胱氨酸是转化为半胱氨酸。
同型半胱氨酸的生化机制
1969年麦克卡利autosomalic homocysteinuria死亡尸检发现体内循环,有一个广泛的动脉血栓和动脉粥样硬化(AS)的病理表现,提出高同型半胱氨酸血半胱氨酸的假设(HHCY)可以导致动脉粥样硬化血管疾病。自那时以来,各国学者对HCY和心血管和脑血管疾病之间的关系做了大量研究。Hcy mercapto-containing氨基酸,主要从蛋氨酸饮食摄入量,蛋氨酸和半胱氨酸代谢是一个重要的中间产品,它本身并不参与蛋白质合成。体内,大约1/2的Hcy和methyltetrahydrofolate蛋氨酸合成酶(蛋氨酸合成酶还原酶,MS)作用下的蛋氨酸和四氢叶酸,在它们被四氢叶酸,N10 -亚甲基四氢化(MTHFR)。Methylenetetrahydrofolate MTHFR methyltetrahydrofolic产生酸。另一半Hcy的转换为胱硫醚β-synthase trans-thiol通路(CBS)。胱硫醚的形成,下部分胱硫醚在半胱氨酸形成半胱氨酸的作用,最后形成丙酮酸,硫酸和水,这个过程所需的维生素B6作为辅酶和丝氨酸羟甲基转移酶,另一部分是生成的同源丝氨酸。前两个代谢途径的任何原因,高Hcy氨酰合成酶,同型半胱氨酸的角色thiolactone(同型半胱氨酸thiolactone HTL)HTL Hcy的氨酰酶合成编辑或校正过程中反应产物的形成,是一个cyclothiolate。Hcy可以直接或间接地导致血管内皮细胞损伤,促进血管平滑肌细胞增殖,低密度脂蛋白氧化的影响,提高血小板功能,促进血栓形成。
同型半胱氨酸测定
第一检测同型半胱氨酸的氨基酸分析,Ueland等测定血清同型半胱氨酸、改善后,目前常用的方法包括以下。
同位素方法:建立Refsum et al . 1985。在这种方法中,HCY浓度是由色谱分离和液体闪烁计数的放射性物质后14 c-labeled腺苷与HCY凝聚。方法具有较高的敏感性和特异性,但它是复杂的和有放射性污染和不能普及。
色谱法:1987年稳定第一次报道的同型半胱氨酸测定气相色谱分析-质谱法。该方法可以同时确定半胱氨酸、蛋氨酸胱硫醚和甲基甘氨酸和其他物质。虽然敏感性,特异性好,但仪器昂贵,不能促进。高效液相色谱法(HPLC)是一个相对成熟和广泛使用的方法。缺点是样本处理、色谱条件、样品检测和量化的许多变化,很难标准化。Fiskertrand和其他第一次在1993年自动高效液相色谱在血浆和尿液HCY、硫醇物质测定。高效液相色谱法可分为各种方法根据衍生化方法(pre-column或邮报的专栏里衍生化),检测方法(荧光、电化学)。应用高效液相色谱法对准确测定同型半胱氨酸需要优秀的设备,精湛的技术经验和适当的时间应用高效液相色谱方法,并选择和准备内部质量控制也是非常重要的。
免疫测定:该方法使用一个特定的anti-S-adenosine同型半胱氨酸单克隆技术,荧光偏振法或免疫测定HCY的决心。雅培公司美国公司使用全自动荧光偏振免疫分析技术,与AXSYM仪器检测HCY、反应原理是:正常的人类血浆HCY减少约1%的类型存在,70%和白蛋白结合,形成小分子二硫的30%。二硫化HCY、混合和蛋白质绑定,等等,减少自由HCY形式(血浆总高半胱氨酸水平)的存在dithiothreitol-containing预处理解决方案:血浆总高半胱氨酸水平,但是在S-adenosyl-L-isotype一半半胱氨酸(SAH)水解酶和腺苷过剩SAH的存在;一个pre-diluted SAH混合物,anti-SAH单克隆抗体和荧光标记示踪S-adenosyl-L-cysteine一起,仪器自动检测偏振光的变化,可以测量的总样本HCY水平。该方法快速、操作方便、自动化程度高,可以减少人为错误,具有良好的准确度和精密度,适用于大多数临床实验室应用。
同型半胱氨酸的功能
同型半胱氨酸是一种重要的氨基酸在体内的蛋氨酸转换。因为肉类,奶酪和其他蛋白质的食物尤其富含蛋氨酸的内容,所以我们几乎每天都吃这蛋氨酸。同型半胱氨酸水平在我们的身体被称为H值(H)、H值可以更准确地预测心脏病或中风的风险,但也比基因预测阿尔茨海默氏症的风险。事实上,H值可以帮助预测近50疾病风险,包括所有导致过早死亡的原因。它甚至可以告诉你目前的速度衰老。通过反射维生素B的营养状况,免疫系统功能和大脑的条件下,可以显示身体的化学状态是正常的。
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