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DNA电泳和蛋白质电泳有什么区别和联系
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作者:
hu123
时间:
2014-10-30 16:09
标题:
DNA电泳和蛋白质电泳有什么区别和联系
DNA
电泳
一般使用的都是
琼脂糖凝胶电泳
,
电泳
的驱动力靠DNA骨架本身的
负电荷
。
蛋白质
电泳
(一般指SDS-PAGE)一般使用的都是
聚丙烯酰胺凝胶
电泳,电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的
负电荷
。
所以相同点就是样品都是带
负电荷
的,从负极向正极移动,移动的距离都和样品的分子量有关。而且这两个电泳体系可以互相交换使用。进行大分子蛋白质电泳时,可以考虑换用琼脂糖凝胶,因为该体系孔径大。相反,如果需要精确到各位数
碱基
的DNA电泳也可以使用
聚丙烯酰胺凝胶
系统,因为使用该系统可以将相差一个
碱基
的两条DNA链分开。
不同点首先是样品不同。这个就不用多说了。其次是结果的观察方法不同。DNA电泳普遍使用EB做染料,在
紫外灯
下观察;而
蛋白电泳
使用的
考马斯亮蓝
染色,还需要经过脱色步骤,不过观察起来比较简单。还有就是
胶体
系的差别,DNA电泳通常是一胶跑到底,而蛋白质电泳则会有分离胶和浓缩胶之区别。
电泳中样品移动的本质确实是样品所携带的电荷。但是,区分这些条带直接可以用分子量而无需使用电荷数,是因为这些样品的电荷/分子量比都是恒定的了。以
DNA分子
为例,它在电泳中的移动是靠其骨架中磷酸所携带的负电荷来实现的,而这个磷酸分子又是每一个
核苷酸
中都有的,所以
DNA分子
所携带的负电荷数是由其
核苷酸
总数决定的。而且,
DNA分子
中
核苷酸
的组成动辄成百上千,在如此大的分子量面前,讨论单个核苷酸之间分子量的差别就显得
毫无意义
。这样,DNA分子中负电荷的量就可以用DNA的分子量来代替,反过来,DNA的分子量也就可以用DNA分子所携带的电荷来代替(一句话,DNA分子的电荷/分子量比是恒定的)。
这在
蛋白电泳
中(特别是SDS-PAGE中)是一样的。在SDS-PAGE中,SDS将
蛋白质变性
成直线分子并紧密包裹于其上,使得其所携带的电荷与蛋白分子量成了一定的比例,剩下的就和
核酸
电泳一样了。
至于为什么
核酸
的横着跑,蛋白竖着跑,个人认为最大的问题是蛋白制胶的过程导致的。蛋白制胶由于使用了两种不同的凝胶系统,所以需要一个水平的分界面。这个分界面在配胶的过程中是依靠
异丙醇
在重力作用下的压力下形成的。所以,一并就竖着跑了~~
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